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本制品采用独特的裂解液Buffer FLS裂解石蜡切片中的组织细胞，释放基因组DNA，并采用独特的石蜡清除剂去除组织中的石蜡，然后裂解液高速离心，将中间层的水相转移到新的离心管中，吸附柱在结合液的作用下吸附水相中的基因组DNA。通过洗涤液的清洗除去吸附膜吸附的少量杂质，在洗脱液的作用下吸附膜释放吸附的基因组DNA，获得高质量的基因组DNA。本制品提取切片基因组DNA无需有毒试剂二甲苯清除石蜡，获得DNA的OD260/OD280比值一般为1.7~1.9，抽提的DNA可直接用于PCR，Real Time PCR，SNP检测和STR检测等下游实验。

• 自备材料：小型高速离心机(最大离心力≥ 12000×g)、水浴锅、1.5mL离心管、无水乙醇和RNase A溶液(10mg/mL)。
  
• 每次使用前请检查Buffer FLS是否出现沉淀，如有沉淀，请于50℃溶解后再使用。
  
• 试剂盒初次开启，按瓶身标签说明在Wash Solution中加入相应量的无水乙醇混匀，在瓶身做好标记。于室温密封保存（15mL Wash Solution加入45mL无水乙醇；30mL Wash Solution加入90mL无水乙醇）。
  
• 试剂盒初次开启，按瓶身标签说明在PW Solution中加入相应量的异丙醇混匀，在瓶身做好标记。于室温密封保存（18mL PW Solution加入12mL异丙醇；36mL PW solution加入24mL异丙醇）。

• 样本处理：
  
  • 石蜡切片：取石蜡切片（6～10μm厚，1×1cm²大小）5～8张，手术刀刮取切片上的石蜡包埋组织于1.5mL离心管内。
    
    • 如果石蜡切片的厚度和大小不符合上述要求，请根据石蜡切片的大小调整石蜡切片的数量。
  • 石蜡块：手术刀刮取约25～30mg的组织样本（并尽量去除周边的石蜡）于1.5mL离心管中。
• 向上述离心管中加入550μL Buffer FLS，再加入50μL Buffer RLA，剧烈涡旋10sec。
  
• 95～98℃水浴30min，期间颠倒混匀3～4次，直至组织样本完全裂解。
  
  • 颠倒混匀时，请务必采用一定长度的镊子，防止高温水浴产生的蒸汽将离心管盖子冲开而烫伤。
• 12000rpm（13400×g）室温离心5～10min。
  
• 使用200μL枪头沿管壁小心吸取中间层的全部水相于新的1.5mL离心管中。
  
  • 离心之后样本管内分为三层，上层是石蜡及蛋白等混合物，下层为杂质沉淀物，中间层为含有组织基因组DNA的水相层。如果分层不彻底可适当延长离心时间，直到上层混合物和水相完全分开。
    
  • 水相的总体积大约为440μL。
    
  • 如果要去除RNA，可以向吸取的水相中加入20μL RNase A (10mg/mL)，室温孵育2～5min。
• 在离心管中加入第5步所吸出的水相溶液2倍体积的无水乙醇，充分混匀，室温静置2～5min。
  
• 将第6步所得混合液加入到吸附柱中，8000rpm（6000×g）室温离心2min，倒掉收集管中废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  
  • 吸附柱最大容量为750μL，若混合液体积超过750μL，则将剩余液体重复第7步上柱。
• 向吸附柱中加入500μL PW Solution，8000rpm（6000×g）室温离心1min，倒掉收集管中的废液，重新将吸附柱放回收集管中。
  
• 向吸附柱中加入600μL Wash Solution，8000rpm（6000×g）室温离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
  
• 重复步骤9一次。
  
• 将吸附柱放回收集管中，12000rpm离心2min。
  
  • 此步决不能省略，否则残留的乙醇会严重影响后续实验。
• 取出吸附柱，放入一个新的1.5mL离心管中，在吸附膜中央加入30～50μL Elution Buffer，静置3min，12000rpm离心2min，得到DNA溶液置于-20℃保存或者直接用于后续实验。
  
  • 如果想提高DNA的得率，可重复步骤8或将Elution Buffer 60℃预热。

• 得率低
  
  • 样本放置时间过长。为了获得高质量的石蜡切片基因组DNA，请选用保存时间不超过1年的石蜡切片。
    
  • 石蜡切片太薄或者太小。请选择符合上述描述的石蜡切片，如果不满足上述描述的要求，请多准备几片切片。
    
  • 裂解不充分。请在裂解过程中间或混匀3～5次，保证样本裂解更充分。
    
  • Wash Solution未加入无水乙醇或者无水乙醇的加量不正确。请严格按照Wash Solution瓶身上的标记加入正确的无水乙醇。
    
  • PW solution未加入异丙醇或者异丙醇的加量不正确。请严格按照PW Solution瓶身上的标记加入正确的异丙醇。
    
  • 洗脱液不合适。洗脱缓冲液的pH值对洗脱效率有影响，如果使用水进行洗脱，请确保其pH值> 7.5，pH值过低可能导致低洗脱效率。
    
  • 洗脱过程操作不当。请将洗脱液加入到吸附膜的中央位置。
• DNA样品不纯，抑制或者干扰后续实验反应
  
  • 忘记加入Buffer RLA。Buffer RLA是专门研发的石蜡清除剂，请严格按照说明书加入相应量Buffer RLA。
    
  • 加入Buffer RLA后混合不充分。Buffer RLA是石蜡清除剂，加入之后请务必充分混合，如果混合不充分可能造成样本中石蜡残留，影响DNA纯度。
    
  • 吸取水相时吸到杂质。请小心吸取中间层水相，不要吸到上层和下层。
    
  • 乙醇有残留。请完成第二次洗涤之后，将吸附柱12000rpm 2min空甩，开盖室温干燥几分钟之后再进行洗脱。